Główną bohaterką gry jest znana z części pierwszej młoda Rebecca Chambers, jedna z członków grupy S.T.A.R.S., która wyruszyła wraz ze swoją drużyną w góry Arklay, z celem odkrycia przyczyny licznych morderstw w okolicach miasta Raccoon City. Niestety, drużyna awaryjnie ląduje w lesie nieopodal miasta Raccoon, a w międzyczasie, wóz policyjny przewożący mordercę Billy’ego Coena zostaje zaatakowany, dzięki czemu przestępca ucieka. Rebecca Chambers i kilku członków z grupy wchodzą do pobliskiego pociągu, który okazuje się być pełen krwiożerczych zombie. Kobieta spotyka na swojej drodze Billy’ego Coena, z którym postanawia na jakiś czas połączyć siły, i spróbować przetrwać ten koszmar.
httpv://www.youtube.com/watch?v=_Oi70hT6cZ8
- W grze są dwie grywalne postaci: Rebecca Chambers oraz Billy Coen, gracz ma możliwość samoczynnego wyboru którym bohaterem chce sterować (drugim wtedy steruje sztuczna inteligencja, nie ma możliwości rozgrywki w trybie multiplayer).
- Grywalne postacie różnią się od siebie: Rebecca ma mniejszą odporność na ataki przeciwników, ale może łączyć ze sobą zebrane lecznicze zioła, Billy natomiast ma większą odporność na ataki przeciwników, przesuwa ciężkie przedmioty, lecz nie może łączyć zdrowotnych ziół.
- Obydwoje mają taką samą ilość slotów w ekwipunku.
- System zapisywania rozgrywki jest taki sam jak w pierwszych częściach.
- W grze nie ma do dyspozycji skrzyni przechowującej wszelkie znalezione przedmioty, gracz chcąc pozbyć się z ekwipunku jakiegoś przedmiotu, zostawia go na ziemi, po którego może potem wrócić.